论文简介：
硕士论文-抗口蹄疫病毒相关基因的筛选及分析，共72页，42409字
摘 要
口蹄疫是一种烈性传染病，其广泛流行给社会造成了巨大经济损失。为了研究口蹄
疫灭活疫苗免疫的分子机制，同时也为抗口蹄疫病毒药物的研制奠定基础，本研究应用
mRNA 差异显示技术，以 PK-15 细胞为材料，A 组用口蹄疫疫苗刺激，B 组正常的细
胞作为对照。分别提取两组细胞总 RNA，纯化后，将每组的 20 个 RNA 样品取等量组
建 RNA 池，然后分别用 3 条锚定引物反转录为 cDNA。采用 3 条锚定引物和 8 条随机
引物组成的 24 对引物对以 cDNA 为模板分别扩增两组样品。两组扩增产物用聚丙烯酰
胺凝胶电泳分析，银染后，切割两组样品的差异表达条带。以回收的差异条带为模板，
进行二次扩增，并回收纯化。回收产物采用以地高辛标记的反 Northern 点杂交鉴定，
阳性条带连接 T 载体，转化大肠杆菌，挑白色单克隆摇菌，经酶切鉴定后测序。
筛选出 8 条抗口蹄疫病毒感染的相关基因，编号 E1~E8，其中 E1、E2、E3 仅在 B
组中表达；E6 在 B 组中表达量高于 A 组；E7、E8 仅在 A 组中表达；E4、E5 在 A 组
中表达量高于 B 组。
应用 BLASTn 工具将 8 条 ESTs 对核酸数据库 nr 和 dbEST 中所有序列进行了同源
性分析。E1 与猪的热休克蛋白基因有很高的相似性，为这个基因的 EST；E2 与猪的
MHCⅠ类基因有很高的同源性；E3、E4、E5、E7 与已有核酸数据库中的基因克隆或
EST 具有较高同源性，为已知的 EST，但功能未知；E6、E8 没有发现同源序列，为新
的 EST。
应用数据库资源将 E5、E7 进行电子延伸后，将延伸序列进行开放阅读框分析，又
经 TBLASTx 分析发现 E7 蛋白质序列与猪的精氨酸酶Ⅰ类蛋白序列有很高同源性。将
E1、E2、E4、E5 序列进行了基因表达谱分析，对 E6、E8 用 BLASTx 工具对非冗余蛋
白质数据库 nr 进行了相似性搜索，在其他物种中找到了相似的基因序列。
本研究筛选出的热休克蛋白基因、MHCⅠ类基因、精氨酸酶Ⅰ类基因和其他未知
功能基因可以作为抗口蹄疫病毒研究中的侯选基因，其具体的功能有待今后进一步研
究。
关键词：口蹄疫；mRNA 差异显示技术；表达序列标签；生物信息学分析
目录
中文摘要………Ⅰ
英文摘要………Ⅱ
缩略表…………Ⅳ
文献综述……… 1
1 mRNA 差异显示技术研究进展 1
2 口蹄疫研究进展……………… 8
3 猪抗病基因的研究进展……15
4 本研究的目的与意义…………19
试验一 抗口蹄疫病毒相关基因的筛选…………20
1 材料…………20
2 方法…………23
3 结果……… 28
4 讨论…………30
5 小结…………32
试验二 差异表达序列的鉴定与克隆测序………33
1 材料…………33
2 方法…………34
3 结果…………39
4 讨论…………43
5 小结…………44
试验三 差异表达序列的生物信息学分析………45
1 试验材料……45
2 试验方法……45
3 结果…………46
4 讨论…………54
5 小结…………57
参考文献………58
致谢 ………… 61

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• 硕士论文-抗口蹄疫病毒相关基因的筛选及分析
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