论文简介：
硕士论文-烟酰胺对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及能量代谢的影响，共61页，36386字
摘 要
本文以生长发育正常、健康状况良好的6周龄雌性昆明小鼠为实验动物，采
用脂肪细胞离体培养技术分离培养小鼠前体脂肪细胞，以不同浓度的烟酰胺
（Nicotinamide, NAM）处理细胞，分析了NAM对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及
能量代谢的影响，并比较了不同浓度NAM对前脂肪细胞分化过程中沉默信息调
节因子1（Sirtuin type 1, Sirt1）及过氧化物酶增殖物活化受体γ（Peroxisome
proliferator-activated receptor-gamma, PPARγ）基因mRNA表达的调控，为进一步
阐明NAM在前体脂肪细胞增殖分化及能量代谢中的作用机理提供理论依据。
通过细胞形态观察、噻唑蓝比色法（Methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）检测
了不同浓度NAM对小鼠前体脂肪细胞增殖活力的影响。结果表明，NAM能促进
小鼠前体脂肪细胞的增殖活力，200μmol/L的NAM促增殖作用较100，300，400，
500μmol/L四种浓度显著（P<0.01）；而500μmol/L则部分抑制细胞增殖（P>0.05）。
通过细胞形态观察、油红O染色等方法分析不同浓度NAM对小鼠前体脂肪细
胞分化的影响。结果表明：低浓度NAM（100~400μmol/L）可促进细胞内脂肪生
成量，促进前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化，200μmol/L NAM作用效果显著
（P<0.01），而高浓度NAM（500μmol/L）则对细胞的分化起抑制作用（P>0.05）。
利用Griss法，ATPase检测试剂盒，罗丹明-123荧光染色法等检测200μmo/L，
500μmol/L两种浓度的NAM对分化24h的前体脂肪细胞中一氧化氮（Nitric oxide,
NO）生成量、三磷酸腺苷酶（Adenosine triphosphatase, ATPase）活性及线粒体
数目的影响。结果显示：低浓度NAM（200μmo/L）可使NO生成量减少，提高ATPase
的活性，增加线粒体的数目（P<0.01）；而高浓度NAM（500μmol/L）能促进NO
的生成，抑制ATPase的活性，使线粒体的数目减少（P>0.05）。
利用实时荧光定量PCR技术（Real-time fluorescent quantitative PCR, FQ-PCR），
检测200μmo/L，500μmol/L两种浓度的NAM对分化24h的前体脂肪细胞Sirt1和
PPARγ mRNA表达的影响。结果表明：低浓度NAM（200μmo/L），可抑制Sirt1
mRNA的表达，上调PPARγ mRNA的表达；而高浓度NAM（500μmol/L）则相反。
关键词：前体脂肪细胞；NAM；增殖；分化；能量代谢
目录
中文摘要…………...……I
英文摘要….…………...............…..…………II
缩略符号………………III
前言…….……….………1
第一部分 文献综述
脂肪细胞的来源………………...……….3
前体脂肪细胞培养模式及其特点…………………...……….3
前体脂肪细胞增殖分化过程…...……….4
脂肪细胞的去分化…………...………….5
分化期间细胞形态的变化……………….………………...…6
影响前体脂肪细胞增殖与分化的因素……….…………...…6
脂肪细胞的能量代谢……..……………10
实时荧光定量 PCR 在基因表达中的应用…………….……….…………....……10
第二部分 试验研究
1不同分离方法对小鼠前体脂肪细胞增殖分化的影响..……15
1.1试验材料和方法…….……………......15
1.1.1实验动物………….…………...……15
1.1.2试验仪器………………...…….……15
1.1.3试验试剂…………….…………...…15
1.1.4试验用品的清洗与消毒…..………..16
1.1.5所用溶液及其配制…….…………...16
1.1.6小鼠前体脂肪细胞离体培养方法的建立………………18
1.1.7细胞的传代………….…………...…19
1.1.8 细胞的增殖………….……………...19
1.1.9细胞的分化………….…………...…20
1.1.10数据统计…………….………….....20
1.2结果与分析…...…20
1.2.1 不同培养方法的比较….…………...20
1.2.2 小鼠前体脂肪细胞的增殖曲线…………..…………..…21
1.2.3 小鼠前体脂肪细胞的分化……………..……………..…22
1.3讨论……………...23
1.3.1小鼠前体脂肪细胞的分离与培养…………..…………..23
1.3.2 离体培养条件下小鼠前体脂肪细胞的生长与分化特点25
2烟酰胺对小鼠前体脂肪细胞增殖和分化的影响……..……26
2.1试验材料和方法...26
2.1.1实验动物……………..……………..26
2.1.2试验器材………26
2.1.3试验试剂……....26
2.1.4溶液的配制…....26
2.1.5试验方法……....26
2.1.6数据统计……....31
2.2试验结果分析…...31
2.2.1NAM 对小鼠前体脂肪细胞增殖的影响…..……………32
2.2.2NAM 对小鼠前体脂肪细胞分化的影响……………......32
2.2.3NAM 对 Sirt1、PPARγ 基因表达的作用……………….33
2.3讨论…………..….36
3烟酰胺对小鼠前体脂肪细胞能量代谢的影响…………..…37
3.1试验材料和方法…………………..….37
3.1.1实验动物…………..……………..…37
3.1.2主要仪器…………..……………..…37
3.1.3主要试剂…………..………………..37
3.1.4试验方法…………..………………..37
3.2试验结果……..….38
3.2.1NAM 对前体脂肪细胞 NO 的影响……….…………….38
3.2.2NAM 对前体脂肪细胞 ATPase 的影响…...…………….38
3.2.3NAM 对前体脂肪细胞线粒体的影响…..……………...39
3.3讨论…………….…………………..…40
结论……………....41
参考文献……………....42
附录………………46
致谢……………....47

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