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硕士论文 猪血清免疫球蛋白制备及免疫球蛋白对仔猪腹泻的影响

  • 简介:硕士论文-猪血清免疫球蛋白制备及免疫球蛋白对仔猪腹泻的影响,共60页,27654字,摘要,免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称 Ig)在动物体内具有重要的免疫和生理调节作,用,是动物体内免疫系统最为关键的组成物质之一。国内外大量研究报
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适用专业:奶牛与小动物疾病
适用年级:大学
论文编号:197335

论文简介:

硕士论文-猪血清免疫球蛋白制备及免疫球蛋白对仔猪腹泻的影响,共60页,27654字
摘要
免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称 Ig)在动物体内具有重要的免疫和生理调节作
用,是动物体内免疫系统最为关键的组成物质之一。国内外大量研究报道免疫球蛋白可
以防治婴幼儿大肠杆菌性腹泻和轮状病毒性腹泻,也能防治仔猪腹泻,加入牙膏中能够
预防和治疗龋齿。我国猪血资源十分丰富,但是并未得到很好的利用,为实现猪血的“变
废为宝”充分开发免疫球蛋白资源,本试验比较了三种血清免疫球蛋白的提取方法;通
过纯化后,对 IgG 轻链和重链的分子量进行了测定;规模化生产免疫球蛋白之前,检测
了免疫球蛋白对仔猪腹泻的影响。试验结果如下所述:
1 不同方法提取猪血清 Ig
在本试验中,选用辛酸法、辛酸-硫酸铵法和硫酸铵分步法从猪血清中提取 Ig,然
后对这三种方法提取的 Ig 的浓度、纯度及提取时效性进行比较,结果显示:硫酸铵分
步法提取的蛋白浓度最高,辛酸-硫酸铵法次之,辛酸法提取的浓度最低;辛酸-硫酸铵
法提取的 IgG 纯度最高、辛酸法次之,硫酸铵分步法纯度最低;三种提取方法时效性比
较,硫酸铵分步法耗时最短,辛酸法次之,而辛酸-硫酸铵法耗时最长。
2 猪血清 IgG 的提纯及其分子量的测定
本试验对 3 个猪血清样品采用分步硫酸铵盐析法粗提取猪血清中的 IgG,透析袋脱
盐,DEAE-SephadexA50 对 IgG 进行纯化,然后对纯化后的 IgG 进行 SDS-PAGE 电泳,
通过 AlphaEaseFC 凝胶分析软件对凝胶进行分析。结果显示:电泳后获得猪 IgG 的重链
(H 链)和轻链(L 链),与标准蛋白 Marker 比较,测得 H 链的分子量约为 56KDa,L
链分子量约 26KDa。
3 口服 Ig 对仔猪腹泻及体重的影响
选择 120 头初生仔猪作为实验动物。实验分三个组:a 组、b 组和 c 组,口服剂量
分别为 0mL、5mL 和 10mL,出生后口服免疫球蛋白,每 3h 口服 1 次,共口服 8 次,
24h 内完成,观察 28d,评估免疫球蛋白对仔猪增重和腹泻的影响。结果显示,口服免
疫球蛋白可以明显地提高仔猪增重和减轻腹泻,且能提高成活率;前 14d 比后 14d 效果
好;10ml 组比 5ml 组效果更突出。
关键词:血清;免疫球蛋白;提取;仔猪;腹泻


目录
摘要..............i
ABSTRACT ...ii
符号说明........iv
前言. 1
文献综述......... 2
1 Ig 与抗体的区别 ......... 2
2 Ig 的结构与分类 ......... 2
2.1 单体分子结构.......... 2
2.2 种类.......... 5
2.3 五类 Ig 的功能 ........ 6
2.4 功能区...... 8
2.5 水解片段.. 8
3 动物胎盘结构与 Ig 转移的关系 ............... 9
4 Ig 吸收研究 ............... 11
4.1 吸收部位研究......... 11
4.2 吸收规律研究......... 11
5 Ig 稳定性研究 ........... 11
5.1 体外稳定性研究.... 11
5.2 消化道内稳定性研究............ 13
6 Ig 的来源及其应用 ... 14
6.1 初乳应用 14
6.2 卵黄 Ig 应用 .......... 14
6.3 血液制品应用........ 14
7 猪血组成及其开发现状........... 15
7.1 猪血组成 15
7.2 猪血资源开发现状 15
8 本研究的意义........... 16
9 创新点....... 16
试验一 三种方法提取猪血清免疫球蛋白. 17
1 材料........... 17
1.1 试验药品 17
1.2 试验仪器 17
1.3 试液的配制............ 17
2 方法........... 18
2.1 猪血清的制备........ 18
2.2 IgG 不同提取方法 . 18
2.3 IgG 透析 . 19
2.4 不同方法提取免疫球蛋白的效果比较 19
3 结果........... 20
3.1 IgG 含量比较 ......... 20
3.2 IgG 纯度比较 ......... 21
3.3 IgG 提取效率比较 . 22
4 讨论........... 22
4.1 辛酸提取法............ 22
4.2 硫酸铵分步提取法 22
4.3 辛酸-硫酸铵提取法 .............. 23
试验二 猪血清 IgG 提纯及其分子量测定  24
1 材料........... 24
1.1 试验试剂 24
1.2 试验仪器 24
2 方法........... 24
2.1 猪血清制备............ 24
2.2 硫酸铵分步提取法提取 IgG(50%-33%-33%)............... 24
2.3 透析除盐 24
2.4 DEAE-SephadexA50 纯化 Ig 25
2.5 IgG 纯度检测及其分子量测定 ............. 25
2.6 紫外分光法检测蛋白浓度.... 25
3 结果........... 26
3.1 IgG 纯度及其分子量结果 ..... 26
3.2 紫外分光法检测蛋白浓度结果............. 27
4 讨论........... 27
4.1 Ig 提取方法 ............ 27
4.2 柱层析的选择........ 27
试验三 口服 Ig 对仔猪腹泻及体重的影响 ............... 29
1 材料........... 29
1.1 试验时间及地点.... 29
1.2 药物提供 29
1.3 试验动物 29
2 方法........... 30
2.1 动物分组与管理.... 30
2.2 数据记录与处理.... 30
3 结果........... 30
3.1 Ig 对体重的影响 .... 30
3.2 Ig 对仔猪腹泻和死亡率的影响 ............ 31
4 讨论........... 32
4.1 Ig 对仔猪腹泻及体重的影响  32
4.2 口服 Ig 时间的选择 .............. 32
结 论............. 33
参考文献....... 34
附录一 透析袋的预处理............. 39
附录二 垂直板 SDS-PAGE 电泳 ............... 40
附录三 硫酸铵饱和度配制表..... 42
致 谢............. 44


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