论文简介：
硕士论文-鸭瘟病毒强毒株AV1221株gH基因的克隆与截短型gH基因的原核表达，共117页，28772字
摘 要
根据 GenBank 中已发表鸭瘟病毒弱毒株序列，设计合成 3 条引物。将鸭瘟强毒
AV1221 株 100 倍稀释，接种 12 日龄鸭胚绒毛尿囊腔，增殖病毒。以病毒 DNA 为模板，
用 PCR 方法，扩增 gH 基因片段，并用巢式 PCR 进行目的 DNA 的筛选。将扩增得到的
基因克隆到 pMD18-T 载体上，经蓝白斑筛选和 PCR 鉴定筛选出阳性克隆进行序列测定，
用生物学软件将所测序列进行分析，然后将其与参考序列进行比较。结果显示：鸭瘟病
毒 AV1221 株 gH 基因全长为 2505bp，编码 834 个氨基酸，gH 基因是一个完整的开放
阅读框。与参考序列比较，核苷酸同源性为 99.7%，氨基酸同源性为 99.3%。上述结果
表明，gH 基因在不同毒株间高度保守。
用生物学软件分析蛋白 gH 的抗原性，选取其中一段抗原性较好的区域，命名为
gH1，重新设计一对引物，引物两端有 EcoRI 和 HindⅢ酶切位点，采用 PCR 方法克隆
该片段。将所得的片段插入 pMAL-2x 载体，构建重组质粒，重组质粒经 PCR 和酶切鉴
定为阳性后，转化入宿主菌 TB1。IPTG 诱导表达，经 SDS-PAGE 分析表明，在 64.4KD
处出现了与预期大小相符的目的条带。对表达蛋白做可溶性分析，证实该蛋白主要以包
涵体形式存在。
关键词：鸭瘟病毒；gH 基因；PCR；原核表达
目录
中文摘要 I
英文摘要 I
英文缩略词表 ............. IV
前言 .... 1
第一章 文献综述............ 3
1. 病原学研究进展.......... 2
2. 鸭瘟病毒诊断方法研究 .... 6
第二章 实验部分........... 11
试验一 鸭瘟病毒 gH 基因的克隆及序列分析....... 11
1. 材料 11
2. 方法 11
3. 结果与分析............. 16
4. 讨论 23
试验二 鸭瘟病毒 gH 基因片断的原核表达......... 24
1. 材料 24
2. 方法 24
3. 结果与分析............. 29
4. 讨论 31
结论 ... 33
参考文献 ................. 34
附录 ... 37
致谢 ... 78

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• 硕士论文-鸭瘟病毒强毒株AV1221株gH基因的克隆与截短型gH基因的原核表达
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