论文简介：
硕士论文-SS基因多态性与13/17罗伯逊易位猪早期生长的关联分析，共57页，33688
摘要
本试验以 13/17 罗伯逊易位杂合子猪的三种杂交组合（13/17 易位杂合子猪×13/17
易位杂合子猪，约克×13/17 易位杂合子猪，皮杜×13/17 易位杂合子猪）的 309 头杂交
后代为研究对象，以生长激素抑制素基因（Somatostatin，SS）作为控制猪早期生长主
基因的候选基因，利用 PCR-SSCP 技术对 13/17 罗伯逊易位猪三个杂交组合的后代生长
激素抑制素基因的外显子 1 及内含子进行单核苷酸多态性检测，同时结合各杂交后代的
早期生长性状记录和核型，研究核型与 SS 基因不同基因型对早期生长性状的遗传效应。
结果如下：
1、采用外周血淋巴细胞培养制备染色体标本，对 13/17 罗伯逊易位杂合子猪三种
杂交组合后代进行核型鉴定，结果显示：13/17 罗伯逊易位杂合子猪×13/17 易位杂合子
猪杂交后代存在三种不同核型的猪：正常核型猪（2n=38）、易位杂合型猪（2n=37）及
易位纯合子猪（2n=36）；约克×13/17 易位杂合子猪与皮杜×13/17 易位杂合子猪的两种
杂交组合的后代中存在正常核型和易位杂合型两种。
2、生长激素抑制素基因外显子 1 不存在多态性；其内含子的 266-602bp 片段存在
两个突变位点(T520C,G521T)，但仅检测到两种基因型：AA 和 AB。遗传多态性分析结
果表明：不同杂交组合后代及不同核型的猪群中 AA 基因型频率（频率范围为 0.58-0.77）
和 A 等位基因频率（频率范围分别为 0.79-0.90）均高于其 AB 基因型频率（0.23-0.42）
和 B 等位基因频率（0.1-0.21）；易位杂合子猪的 AB 基因型频率（0.42）均高于正常猪
（0.25）及易位纯合子猪（0.40）。经 χ2 检验，差异不显著（P＞0.05），在群体中基因
型频率分布处于哈代－温伯格平衡状态。
3、三种杂交组合后代中，相同核型不同基因型的猪之间，各时期的体重差异均不
显著（P＞0.05），但 AB 基因型猪的各阶段体重均略高于 AA；13/17 易位杂合子猪×13/17
易位杂合子猪杂交后代中的正常核型猪与皮杜×13/17 易位杂合子猪杂交后代中的易位
杂合子猪的 20-40 日龄平均日增重 AA＜AB（P＜0.05）。不同核型相同基因型的杂交后
代中，13/17 易位杂合子猪×13/17 易位杂合子猪杂交后代 AB 基因型猪的 40 及 55 日龄
重与约克×13/17 易位杂合子猪杂交后代中 AA 及 AB 两基因型猪的 20、40 及 55 日龄重，
均为易位杂合子猪大于正常猪（P＜0.05）。
关键词：猪；罗伯逊易位；生长激素抑制素基因；单核苷酸多态性；SSCP；生长性状
目 录
摘要.... 1
ABSTRACT........... 2
符号和缩略词说明. 4
引 言...... 5
第一章文献综述..... 6
1. 罗伯逊易位的研究进展..... 6
1.1 罗伯逊易位的现状和内容 6
1.2 罗伯逊易位研究的技术方法............. 7
1.2.1 电镜联会复合体（SCs）观察 ....... 7
1.2.2 荧光原位杂交(FISH)技术.............. 7
1.2.3 建立易位染色体文库、显微解剖和 PCR...... 8
1.3 罗伯逊易位对携带者的影响............. 8
1.4 罗伯逊易位的应用............ 9
2 SS 基因研究进展 ............... 10
2.1 SS 在动物体内的分布 .... 10
2.2 SS 基因的表达 ................ 11
2.3 SS 的生物学功能 ............ 11
2.3.1 对 GH 分泌的调节作用 ............... 11
2.3.2 对消化系统的调节作用................ 12
2.3.3 免疫调节作用............... 12
2.3.4SS 与神经传导 .............. 13
2.3.5SS 与细胞的增殖 .......... 13
2.4 SS 的分子生物学研究现状 ............. 13
2.4.1 猪的 SS 基因 ................ 13
2.4.2 牛的 SS 基因 ................ 13
2.4.3 家鼠的 SS 基因 ............ 14
2.4.4 羊的 SS 基因 ................ 14
2.4.5 鸡的 SS 基因 ................ 14
3.单核苷酸多态性的研究进展.............. 14
3.1 单核苷酸多态性.............. 14
3.2 基因组 SNPs 的发现及定位............ 15
3.2.1 直接测序...... 15
3.2.2DNA 芯片法 . 16
3.2.3 基于生物信息学的 SNP 候选位点搜索 ....... 16
3.3 SNPs 的检测方法............ 16
3.3.1PCR-单链构象技术 ...... 16
3.3.2 限制性片段长度多态性................ 16
3.3.3 突变错配扩增检验....... 17
3.3.4 动态等位基因特异性杂交............ 17
3.3.5 分子信标技术............... 17
3.4 SNPs 的应用前景............ 17
第二章 三种杂交后代猪的核型鉴定... 19
1.试验材料............ 19
1.1 主要试剂......... 19
1.2 主要仪器设备 19
2 试验方法 ........... 20
2.1 综合培养基的分装.......... 20
2.2 采血................ 20
2.3 淋巴细胞培养 20
2.4 秋水仙素处理. 20
2.5 标本片制作与观察.......... 20
2.6 染色体核型鉴定.............. 21
3 试验结果与分析................ 21
4 讨论 .. 21
第三章 三种杂交组合后代生长激素抑制素基因单核苷酸多态性的检测........... 23
1 试验材料............ 23
1.1 主要试剂......... 23
1.2 试剂的配制.... 23
1.2.1 提取 DNA 所用相关试剂 ............ 23
1.2.2 电泳所用试剂的配制... 24
1.3 主要仪器........ 24
2 试验方法............ 25
2.1 仔猪早期生长记录.......... 25
2.2 统计软件........ 25
2.3 基因组 DNA 的提取及质量检测 .... 25
2.3.1 基因组 DNA 的提取 ... 25
2.3.2 DNA 质量的检测 ......... 26
2.4 引物的设计与合成......... 26
2.5 PCR 反应体系及反应条件 ............. 27
2.5.1PCR 反应体系 .............. 27
2.5.2 PCR 反应条件 ............. 27
2.6 电泳................ 27
2.6.1 聚丙烯酰胺电泳........... 27
2.6.2 图像分析..... 28
2.7 PCR 产物的回收 ............ 28
2.8PCR 产物的克隆 ............. 29
2.8.1 PCR 产物克隆连接反应 .............. 29
2.8.2 大肠杆菌感受态细胞的制备....... 29
2.8.3 转化............. 30
2.8.4 阳性克隆的筛选.......... 30
2.8.5 重组质粒的鉴定和提取............... 30
2.8.6 测序............. 30
3 结果与分析........ 31
3.1 PCR 扩增结果 ................ 31
3.2 SSCP 检测结果 ............... 31
3.3 猪 SS 基因不同基因型在三种杂交组合后代猪群中的分布 .......... 32
3.4 猪 SS 基因 AA 和 AB 基因型的序列比较 ...... 34
3.5 猪 SS 基因不同基因型与三种杂交组合后代初生重和早期生长的关联分析 34
4 讨论... 36
4.1 猪 SS 基因单核苷酸多态性的检测 36
4.2 猪 SS 基因不同基因型与三种杂交组合后代的生产性状间的关系 ................ 38
结论...... 39
参考文献............... 40

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• 硕士论文-SS基因多态性与13/17罗伯逊易位猪早期生长的关联分析
• 硕士论文-SS基因多态性与13／17罗伯逊易位猪早期生长的关联分析.doc  [1.12MB]