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硕士论文 酿酒葡萄再生体系的建立及遗传转化的初步研究

  • 简介:硕士论文-酿酒葡萄再生体系的建立及遗传转化的初步研究,共60页,35724字,摘 要,葡萄遗传背景复杂,育种周期长,常规育种方法较难实现品种改良,随着转基因技术,的出现和发展,把目的基因转入植物体内,可在不改变多种优良性状的前提
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适用专业:生物化学与分子生物学
适用年级:大学
论文编号:197646

论文简介:
硕士论文-酿酒葡萄再生体系的建立及遗传转化的初步研究,共60页,35724字
摘 要
葡萄遗传背景复杂,育种周期长,常规育种方法较难实现品种改良,随着转基因技术
的出现和发展,把目的基因转入植物体内,可在不改变多种优良性状的前提下定向改良某
些性状,提高育种效率,为葡萄的育种改良提供了一条新途径。
葡萄再生频率低是造成葡萄遗传转化困难的关键因素之一。本研究以优良酿酒葡萄品
种歌海娜(Grenache )、霞多丽( Chardonnay)、西腊( Syrah)及砧木3309试管苗为试材,
对影响离体茎段不定芽诱导的因素,如基因型、接种外植体类型、基本培养基类型、生长
调节剂种类及浓度配比、接种方式以及培养条件等进行了较系统的研究,建立了歌海娜、
西腊及霞多丽离体茎段再生体系;以酿酒葡萄品种霞多丽胚性细胞系为试验材料,采用
GUS检测法,对影响农杆菌介导的遗传转化的因素如超声波处理时间、AS浓度、DTT浓度
进行了研究,优化了遗传转化的条件;并以歌海娜、西腊离体茎段为试验材料,进行了抗
寒目的基因CBF1转化葡萄的研究。
主要研究结果如下:
1.基因型是影响葡萄离体茎段再生的重要因素,研究结果表明:歌海娜品种的不定芽
诱导效率显著高于西腊和霞多丽品种。
2.通过对不同培养基的筛选,确定了 MS 培养基为霞多丽离体茎段诱导不定芽的最适
基本培养基。
3.歌海娜、霞多丽和西腊三种基因型中,仅从茎段外植体诱导出不定芽,而叶片和叶
柄外植体均未能诱导出不定芽。茎段不同接种方式对不定芽的诱导效果有显著影响。
4.植物生长调节剂对离体茎段不定芽的诱导有较大影响。细胞分裂素 BA 能使歌海娜、
霞多丽、西腊及砧木 3309 等四种基因型的离体茎段诱导产生不定芽,而 TDZ 只能诱导西
腊及砧木 3309 的茎段产生不定芽,而且 BA 对不定芽的诱导效率要高于 TDZ,由 TDZ 诱
导的不定芽畸形较多,不易成苗。歌海娜离体茎段最适再生培养基为: MS+BA 1.0
mg/L+IBA 0.01 mg/L,不定芽诱导率为 25%;西腊离体茎段再生培养基为:MS+BA 1.0
mg/L+NAA 0.05 mg/L,不定芽诱导率为 5.9%;砧木 3309离体茎段再生培养基为:MS+BA
1.0 mg/L+IBA 0.01 mg/L,不定芽诱导率为 9.5%;不定根诱导培养基为:1/2MS+IAA 0.05
mg/L。霞多丽茎段诱导丛生不定芽的最适培养基为:MS+BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。
5.暗培养处理可显著提高茎段的不定芽诱导率,适宜暗培养时间为 14 d 左右。
6.通过对影响农杆菌介导葡萄胚性细胞系遗传转化效率因素的研究表明,AS 浓 度 、
DTT 浓度及超声波处理时间对胚性细胞系转化效率有明显影响,以 AS 浓度 100 μmol/L、
DTT 浓度 3 mg/L、超声波处理时间 5 min 为葡萄胚性细胞系的较适合转化条件。
7.酿酒葡萄离体茎段诱导的不定芽对潮霉素较敏感,潮霉素 1.0mg/L 即达到歌海娜、
西腊诱导不定芽的致死浓度,可作为转化后抗性不定芽的筛选浓度。
关键词:酿酒葡萄;茎段;不定芽;遗传转化;CBF1 基因
目录
摘要 ………… Ⅰ
英文摘要 … Ⅲ
缩略词对照表 Ⅴ
1. 文献综述…… 1
1.1 葡萄再生体系研究进展 …… 2
1.2 葡萄转基因技术体系研究进展5
1.3 葡萄转基因研究展望 ……… 9
1.4 研究的目的和主要内容………10
2.葡萄器官再生体系的建立… 12
2.1 试验材料 12
2.1.1 供试材料及砧木品种…… 12
2.1.2 试剂…… 12
2.2 试验方法 12
2.2.1 葡萄无菌苗的获得……… 12
2.2.2 葡萄无菌苗的增殖……… 12
2.2.3 不同外植体对不定芽诱导的影响………… 12
2.2.4 不同基本培养基对离体茎段不定芽诱导的影响………………12
2.2.5 不同接种方式对离体茎段诱导不定芽的影响 12
2.2.6 植物生长调节剂种类及不同浓度配比对离体茎段诱导不定芽的影响…………13
2.2.7 不同暗培养时间对霞多丽不定芽诱导的影响13
2.3 结果与分析 …………… 13
2.3.1 不同外植体类型对不定芽诱导的影响 … …13
2.3.2 不同基本培养基对离体茎段不定芽诱导的影响………………14
2.3.3 不同接种方式对离体茎段不定芽诱导的影响……………… 15
2.3.4 植物生长调节剂种类及不同浓度配比对离体茎段不定芽诱导的影响…………15
2.3.5 暗培养时间对离体茎段不定芽诱导的影响 20
2.4 讨论……… 20
2.4.1 基因型对葡萄离体茎段诱导不定芽的影响 …20
2.4. 2 外植体类型对离体茎段不定芽诱导的影响 …………… 21
2. 4. 3 培养基对 离体 茎段 不定 芽诱 导的 影响 ………… …… …… …… …… …… ……… …… 21
2.4.4 植物生长调节剂种类及不同浓度配比对离体茎段不定芽诱导的影响 …………21
2.4.5 暗培养时间对离体茎段不定芽诱导的影响 …22
3 农杆菌介导的葡萄胚性细胞系遗传转化条件的优化……………26
3.1 材料与方法 26
3.1.1 试验材料 26
3.1.2 菌株和载体…………… …26
3.1.3 培养基… 26
3.1.4 试验方法 26
3.2 结果与分析 28
3.2.1 超声波处理对胚性细胞系转化效率的影响 28
3.2.2 乙酰丁香酮对胚性细胞系转化效率的影响 …29
3.2.3 DTT 对胚性细胞系转化效率的影响 ……… 29
3.3 讨论…… 30
3.3.1 超声波处理对转化效率的影响…………… 30
3.3.2 乙酰丁香酮对转化效率的影响…………… 30
3.3.3 抗氧化剂对转化效率的影响…………… ..30
4 CBF1 基因转化葡萄的研究 32
4.1 实验材料 32
4.2 试验方法… 32
4.2.1 葡萄茎段外植体的获得… 32
4.2.2 潮霉素对‘霞多丽’茎段不定芽诱导的影响…32
4.2.3 遗传转化 32
4.3 抗性植株的检测…………… 33
4.3.1 主要试剂…33
4.3.2 试验方法…33
4.4 结果与分析 35
4.4.1 潮霉素对离体茎段不定芽诱导的影响…… 35
4. 4 . 2 抗性 植 株 的 获 得 …… … … … … … … 35
4.4.3 抗性植株的检测………… 36
4.5 讨论 …… 3
4.5.1 潮霉素对‘霞多丽’茎段不定芽诱导的影响37
4. 5 . 2 抗性 植 株 的 获 得 …… … … … … … … … … 37
4.5.3 抗性植株的检测………… 37
5 结论和后续工作展望…………39
参考文献…………40
附录……………46
致谢 …… 47


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