论文简介：
硕士论文-海蜇降压肽提取工艺研究与效果测定，共125页，67418字
摘 要
本文首先对不同种类和处理的海蜇分部进行成分和氨基酸测定，海蜇和沙蜇成分相
差不大，面蜇和黄斑海蜇的蛋白质含量要低于海蜇；海蜇伞部的总氨基酸含量最多，为
127.32 mg/g 干重，必需氨基酸含量也达到 29.31%。
对两种现有降压肽体外测定方法（紫外分光光度法和可见分光光度法）进行了对比
研究，前法由于萃取过程中不可控因素较多，精密度太差而致使测定误差较大，且操作
麻烦，不宜用于降压肽的测定；可见分光光度法不需从反应体系中提取马尿酸，操作相
对简单，灵敏度高、数据稳定，重复性也较好，但当用猪肺粗提 ACE 酶液时数据不稳
定，只有用较纯的 ACE 酶才能得到比较稳定的测定结果。
探索了薄层层析-分光光度法测定降压肽的体外 ACE 抑制效果的条件，精密度试验
的变异系数为 2.17%（n =8），此法测定降压肽，重复性好，数据稳定，但操作复杂，
步骤繁琐，人为因素影响较大。建立的薄层色谱扫描法，测定简便，准确度高，线性回
归方程为：y=20431.098+713.059x ，相关系数 r=0.99185。测定精密度的变异系数为
0.04%。
利用酶解法制备海蜇降压肽，并对工艺参数做了一些探讨。发现腌渍海蜇皮冲洗、
匀浆、杀菌后，按 50ku/100gPr 的添加量加入中性蛋白酶，在 45℃水浴中酶解 9h，粗滤
后通过 5kDa 的超滤膜时，ACE 抑制率最大。100℃浓缩对其影响不大，冷冻会使其 ACE
抑制率明显降低。
体内实验研究了海蜇降压肽对肾动脉狭窄和 L-NNA 药物致高血压两种高血压模型
血压的影响，结果表明：在灌胃剂量小于 60mg/Kg.bw 剂量范围内，降血压肽的剂量与
两种模型的收缩压降压效果均成一定的正相关性。灌胃剂量超过 60mg/Kg.bw 时，血压
下降值都基本趋于平缓。海蜇降血压肽对正常兔子血压无影响。
海蜇降压肽五个不同样品的体内和体外测定对比,测定结果基本一致,冰冻使样品
降压效果明显减小，而灭菌和浓缩对降压效果影响不大。体外模拟消化作用对海蜇降压
肽降压效果影响不大，说明降压肽具有抗消化的能力。脱苦、缓释处理后的体内体外对
比发现，先加入 0.5%粉末活性炭，55℃下吸附 20min，再加入 1.5%β-环糊精，于 65℃下
包埋 30min 的处理最好，不仅能脱出苦味，而且大大延长了药效，起到了缓释的作用。
将海蜇降压肽与四种化学合成药物相比较。体外试验显示：北京降压 0 号抑制率最
低，贝那普利抑制率最高达到 64.9%，海蜇降压肽次之，而缬沙坦和伲福达没有抑制效
果。体内试验：在灌胃剂量正常条件下，钙离子拮抗剂伲福达不能对肾动脉狭窄高血压
模型起到降压效果；海蜇降压肽比缬沙坦降血压肽作用时间较快，维持时间较短，但如
果加大剂量也会达到与缬沙坦维持时间相同的效果；与盐酸贝那普利相比，贝纳普利降
压幅度较大些，但加大剂量会引起低血压，这样大的落差对高血压病人是极为不利的。
而降血压肽不会出现这种情况。
进行海蜇降压肽的放大试验，并对样品做了体内体外测定。在体内测定中，D9 和
E10 均能使高血压降至正常值，且维持时间在 20 个小时。体外测定 D9 和 E10 的抑制率
分别为 67.3%和 61.5%，其它样品则抑制率较小。
关键词：高血压；海蜇降压肽；薄层色谱；降压活性；制备工艺
目录
摘要....... 1
Abstract 3
缩略语(Abbreviation) . 5
第一章 引言..... 1
1.1 高血压及血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）... 1
1.1.1 高血压的危害及现状...... 1
1.1.2 高血压的分类与成因...... 1
1.1.3 血管紧张素转化酶与高血压..... 2
1.1.3.1 血管紧张素转化酶....... 2
1.1.3.2 ACE 对血压的调节作用.......... 2
1.1.4 ACEI 的研究进展 ........... 3
1.2 食物蛋白源降压肽的研究现状..... 3
1.2.1 降压肽与 ACE 抑制剂的区别 ... 3
1.2.2 食物蛋白源降压肽的降压机理.. 4
1.2.3 食物蛋白源降压肽的来源及种类.......... 4
1.2.4 食物蛋白源降压肽的制备研究.. 6
1.2.4.1 制备方法的研究进展... 6
1.2.4.2 多肽脱苦的研究........... 7
1.2.5 食物蛋白源降压肽的利弊分析.. 8
1.3 降压肽活性测定方法的研究进展 8
1.3.1 体外活性测定方法.......... 8
1.3.1.1 紫外分光光度法........... 8
1.3.1.2 可见分光光度法........... 9
1.3.1.3 酶偶联法......... 10
1.3.1.4 高效液相色谱法........ 10
1.3.1.5 高效毛细管电泳.........11
1.3.2 体内活性测定的高血压模型.... 12
1.3.2.1 肾血管性高血压模型. 12
1.3.2.2 自发性高血压大鼠模型......... 12
1.3.2.3 药物诱导性高血压大鼠模型. 13
1.4 海蜇概况... 13
1.4.1 海蜇资源利用状况........ 13
1.4.1.1 海蜇的外貌与习性..... 13
1.4.1.2 我国的海蜇种类及分布......... 14
1.4.2 海蜇的研究进展 16
1.4.2.1 食用研究进展. 16
1.4.2.2 药用研究进展. 16
1.4.2.3 海蜇成分测定的研究进展..... 17
1.5 本课题的研究目的与意义.......... 19
第二章 海蜇成分测定与氨基酸分析........... 21
2.1 材料与方法.......... 21
2.1. 1 材料与试剂...... 21
2.1. 2 主要仪器.......... 21
2.2 实验方法.. 21
2.2.1 样品的前处理.... 21
2.2.2 蛋白含量测定.... 22
2.2.3 水分的测定........ 22
2.2.4 灰分的测定........ 22
2.2.5 脂肪测定 22
2.2.6 糖类测定 22
2.2.7 氨基酸测定........ 22
2.2.8 必需氨基酸指数 22
2.3 实验结果与讨论.. 22
2.3. 1 海蜇的主要成分测定.. 22
2.3.2 腌制海蜇的无机成分分析........ 23
2.3.3 四种海蜇的氨基酸组成及含量分析... 24
2.4 本章小结... 25
第三章 现有 ACEI 体外抑制活性测定方法的对比研究... 27
3.1 紫外分光光度测定方法及探索... 27
3.1.1 材料与方法....... 27
3.1.1.1 材料与试剂.... 27
3.1.1.2 主要仪器......... 27
3.1.2 方法........ 28
3.1.2.1 药品的配制.... 28
3.1.2.2 测定方法........ 28
3.1.3 结果与分析........ 29
3.1.3.1 底物的用量对结果的影响..... 29
3.1.3.2 乙酸乙酯萃取次数对结果的影响.... 30
3.1.3.3 乙酸乙酯的烘干时间和温度对结果的影响 30
3.1.3.4 紫外分光光度法精密度实验 31
3.1.4 小结....... 31
3.2 可见分光光度测定方法及探索.. 32
3.2.1 材料与方法....... 33
3.2.1.1 材料与试剂.... 33
3.2.1.1 实验仪器与设备......... 33
3.2.2 方法........ 33
3.2.2.1 马尿酸标准曲线建立. 33
3.2.2.2 测定方法........ 33
3.2.2.3 ACE 的抑制率的计算方法.... 34
3.2.3 结果与分析........ 34
3.2.3. 1 喹啉与 BSC'最佳比例的选择.......... 35
3.2.3.2 温度对反应体系的影响......... 35
3.2.3.3 混匀方式对测定的影响......... 36
3.2.3.4.ACE 酶液的影响及稳定性研究 ....... 36
3.2.3.5 可见分光光度法测定的精密度试验. 37
3.2.4 小结........ 37
3.3 本章小结.. 38
第四章 降压肽体外活性新测定方法的建立研究... 39
4.1 薄层层析-分光光度法的建立 ..... 39
4.1.1 实验材料和方法........... 39
4.1.1.1 实验材料...... 39
4.1.1.2 实验仪器与设备......... 39
4.1.2 方法....... 39
4.1.2.1 展开剂的配制 40
4.1.2.2 显色剂的配制 40
4.1.2.3 实验步骤........ 40
4.1.2.4 标准曲线的建立........ 40
4.1.2.5 ACE 抑制率的计算 ... 40
4.1.3 结果与分析........ 41
4.1.3.1 展开剂最佳配比的选择........ 41
4.1.3.2 显色剂储存时间对结果的影响......... 41
4.1.3.3 补充显色剂配比......... 42
4.1.3.4 补充显色后水浴温度与时间的关系 42
4.1.3.5 马尿酸标准曲线的建立........ 43
4.1.3.6 薄层层析-分光光度法的精密度试验 .......... 43
4.1.4 小结........ 44
4.2 薄层色谱扫描法的建立.. 45
4.2.1 材料与仪器....... 45
4.2.1.1 材料与试剂.... 45
4.2.1.2 主要仪器......... 45
4.2.2 实验方法 46
4.2.2.1 展开剂的配制. 46
4.2.2.2 半自动点样仪的操作及设定 46
4.2.2.3 薄层扫描仪的参数设定........ 46
4.2.2.4 光谱扫描........ 47
4.2.2.5 标准曲线的建立........ 47
4.2.2.6 样品的测定.... 47
4.2.2.7 抑制率的计算. 48
4.2.3 结果与讨论........ 48
4.2.3.1 盐酸浓度及用量对点样液的影响.... 48
4.2.3.2 冷冻时间对点样液的影响.... 49
4.2.3.3 光谱扫描确定最大吸收波长. 49
4.2.3.4 标准曲线的建立........ 50
4.2.3.5 样品测定加样回收率试验.... 50
4.2.3.6 稳定性和精密度试验 50
4.2.4 小结....... 51
4.3 本章小结.. 52
第五章 海蜇降压肽制备工艺的研究........... 54
5.1 材料与仪器........... 54
5.1.1 原料与试剂....... 54
5.1.2 仪器........ 55
5.2 方法........... 55
5.2.1 测定方法 55
5.2.2 抑制率的计算.... 55
5.2.3 工艺流程 55
5.3 结果与分析........... 56
5.3.1 海蜇种类和部位对降压效果的影响.... 56
5.3.2 海蜇前处理中灭菌对结果的影响........ 57
5.3.3 酶解过程中酶的种类对抑制率的影响 57
5.3.4 酶解过程中的双因素探索........ 58
5.3.4.1 酶解温度与时间......... 58
5.3.4.2 酶用量与时间对抑制率的影响......... 59
5.3.5 酶的用量 、酶解温度、时间的正交试验设计.......... 59
5.3.6 超滤膜的选择.... 61
5.3.7 冷冻温度与时间对抑制率的影响........ 61
5.3.8 浓缩温度与时间对抑制率的影响........ 62
5.4 本章小结... 62
第六章 海蜇降压肽体内降压活性的研究... 64
6.1 材料与仪器.......... 64
6.1.1 实验动物与原料........... 64
6.1.2 试剂....... 64
6.1.3 仪器及用具....... 64
6.2 实验方法... 65
6.2.1 试验用兔子饲喂方法.... 65
6.2.2 实验兔子血压测定方法........... 65
6.2.3 肾动脉狭窄型高血压模型的建立方法........... 65
6.2.4 L-NNA 致高血压模型的建立 .. 66
6.2.5 实验动物分组方法....... 66
6.2.6 海蜇降压肽液体样品与冻干品溶液的制备方法........ 66
6.2.7 数据记录观察方法........ 66
6.3.结果与讨论........... 66
6.3.1 高血压兔子模型........... 67
6.3.2 剂量与降压幅度的量效关系.... 67
6.3.3 降压肽对两种高血压模型的降压效果 68
6.3.4 降压肽剂型对降压效果的影响比较.... 68
6.3.5 降血压肽剂量与降压幅度、压降时间的关系 69
6.3.6 降压肽对正常兔子血压的影响 70
6.4 本章小结... 71
第七章 海蜇降压肽体内降压活性与体外抑制作用的相关性比较研究... 72
7.1 材料与仪器........... 72
7.1.1 材料与试剂........ 72
7.1.2 仪器....... 72
7.2 方法........... 73
7.2.1 体内测定 73
7.2.2 体外测定 73
7.3 结果与分析........... 73
7.3.1 不同样品体内体外测定对比... 73
7.3.1.1 体内降压活性随时间的变化 73
7.3.1.2 体外 ACE 抑制率的测定 ..... 74
7.3.2 同一样品不同处理的体内体外测定... 74
7.3.2.1 体内降压效果测定.... 74
7.3.2.2 体外 ACE 抑制率随时间的变化 ...... 74
7.4 本章小结... 75
第八章 模拟体内消化处理和脱苦、缓释处理对海蜇降压肽活性影响的研究... 76
8.1 材料、试剂与仪器........... 76
8.1.1 材料与试剂........ 76
8.1.2 仪器........ 76
8.2 方法........... 77
8.2.1 人工胃液的配制 77
8.2.2 人工肠液的配制 77
8.2.3 消化降压肽的制备........ 77
8.2.4 体外测定 77
8.2.5 体内测定 77
8.3 结果与分析........... 77
8.3.1 模拟体内消化处理后降压肽的体内测定........ 77
8.3.2 模拟体内消化处理后降压肽的体外 ACE 抑制率 ..... 78
8.3.3 脱苦与缓释处理方法的选择.... 78
8.3.3.1 脱苦与缓释后降压肽的体外 ACE 抑制率测定 ..... 78
8.3.3.2 脱苦与缓释后降压肽的体内降压活性测定 79
8．4 本章小结 79
第九章 降压肽与药物降压效果的对比研究........... 81
9.1 试剂与仪器........... 81
9.1.1 试剂与材料....... 81
9.1.2 仪器....... 81
9.2 测定方法... 82
9.3 结果与分析.......... 82
9.3.1 降压肽与药物的体外对比测定 82
9.3.2 降压肽与三类代表性药物各自的体内量效关系变化比较.... 82
9.3.2.1 降压肽与钙离子拮抗剂类降压药伲福达的降压效果对比 82
9.3.2.2 降压肽与血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂类降压药缬沙坦的降压效果对比.... 83
9.3.2.3 降压肽与 ACE 抑制剂类降压药贝那普利的降压效果对比 ......... 83
9.4 本章小结... 84
第十章 海蜇降压肽制备工艺的放大试验... 85
10.1 材料与方法........ 85
10.1.1 材料与试剂..... 85
10.1.2 主要设备.......... 85
10.2 方法......... 85
10.2.1 放大试验生产车间图.. 85
10.2.2 放大试验工艺流程...... 85
10.2.4 体外测定.......... 88
10.2.5 体内测定.......... 88
10.3 结果与讨论......... 88
10.3.1 感官鉴评.......... 88
10.3.2 试样品的体外 ACE 抑制作用测定 ... 89
10.3.5 中试样品的体内降压活性测定.......... 89
10.4 小结与建议......... 90
总结..... 91
论文的创新点. 93
参考文献......... 94
致谢..... 99

论文文件预览：
共1文件夹，1个文件，文件总大小：3.79MB，压缩后大小：1.77MB

• 硕士论文-海蜇降压肽提取工艺研究与效果测定
• 硕士论文-海蜇降压肽提取工艺研究与效果测定.doc  [3.79MB]